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當前位置:首頁產品中心科研細胞原代細胞復蘇/凍存人外周血單個核細胞
人外周血單個核細胞

產品簡介

人外周血單個核細胞分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中shou次提出外周血這一新概念。

產品型號:復蘇/凍存
更新時間:2025-06-30
廠商性質:生產廠家
訪問量:416
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人外周血單個核細胞

產品名稱 :人外周血單個核細胞

產品貨號 :YLK-XB0652h

組織來源 :外周血

產品規格 :5×105cells/T25細胞培養瓶


細胞簡介:

外周血單個核細胞分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中shou次提出外周血這一新概念。外周血單個核細胞(PBMC)即外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞。目前,主要的分離方法是密度梯度離心法,因為血液中各有形成分的比重存在差異,因此得以分離出不同的細胞。


質量檢測

優利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。


培養信息

培 養  基 : 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 半貼半懸浮
細胞形態 : 圓形
傳代特性 : 不增殖;不傳代
傳代比例 : 不傳代
消 化  液 : 0.25% 胰蛋白/酶
培養條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%


客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作

1. 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。

2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養瓶傳代,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞貼壁后,培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞貼壁后,培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。


注意事項

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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